实验室诊断
　　沙眼衣原体感染实验室诊断
　　诊断沙眼衣原体感染常用的实验室方法有以下几种：
　　①标本涂片染色直接镜检；
　　②细胞培养法；
　　③抗原检测试验，包括直接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验；
　　④DNA杂交及聚合酶链反应(PCR)法；
　　⑤血清抗体检测；
　　支原体感染实验室诊断
　　支原体感染的实验室诊断主要是支原体的培养和血清学鉴定，目前主要采用基因诊断。
　　1．支原体培养：
　　a．采集标本，一般为泌尿生殖试子或刷片，少数取前列腺液，精液、关节液，或取输卵管，直肠活检物，近年来用初段尿标本离心物，以取代尿道拭子。拭子取材时，将拭子插入男性尿道2-4cm，用力擦取。该方法容易造成尿道损伤及继发感染。用时须慎重。女性则需先清洁宫颈鳞状与柱状上皮结合部，用细胞刷收集宫颈标本，能增加感染细胞的数量，较棉拭子敏感性高。
　　b．常用培养基为牛心浸液或蛋白胨，并含1%新鲜酵母浸液，10-20%动物血清及0.5%氯化钠，还可加葡萄糖和精氨酸以促进MH和MG生长，加入尿素以供UU代谢，适量加青霉素抑制杂菌。
　　2．血清学鉴定法：最常用的是琼脂扩散法，即将支原体接种到琼脂皿上。然后再用浸过适量血清的滤纸放到琼脂表面，观察哪一种能抑制支原体生长。也可用琼脂表面的菌落作荧光抗体染色法，用落射荧光显微镜观察，此法的优点是可以利用最初生长在琼脂表面上的菌落而不必将支原体传代。
　　血清学诊断试验：酶联免疫吸附试验（ELISA）敏感性高：微量免疫荧光法（MIF）具有快速特点。
　　3．基因诊断：利用DNA探针对支原体诊断其敏感性稍差，但特异性高，用聚合酶链反应（PCR），敏感性、特异性均高。具体检测方面如下：
　　
　　患者来就医时，男性主诉常常是尿道疼，不适感或从外尿道流出脓样粘液，或因患“淋病”久治不愈，反复出现上述现象；女性病人常常无症状，只是白带多或因其丈夫有“淋病”史，特意来检查确诊。
（一）临床症状
首先应排除淋菌性尿道炎
衣原体性尿道炎与淋菌性尿道炎鉴别 临床病症 沙眼衣原体 淋球菌
潜伏期 1-3周 2-5日
发病 缓慢 突然
尿路刺激征 轻或无 多见
全身症状 无 偶见
尿道分泌物 少或无，粘液性或浆液性稀薄 常见，量多呈脓性
无症状带菌者 相当多 有，但不多
白细胞内G- 双球菌 （一） （+）
病原菌培养 沙眼衣原体 淋球菌

　　在诊断非淋菌性尿道炎时，常常需要与淋菌性尿道炎、前列腺炎鉴别。前者在淋病中已有论述。非淋菌性尿道炎的特点是症状较淋病为轻，潜伏期较淋病为长，分泌物较淋病为清稀。而慢性前列腺炎也常常伴有尿道的不适和尿道口出现分泌物，但慢性前列腺炎主要是会阴不适，排尿不畅，尿道口分泌物为前列腺液。
　　非淋菌性尿道炎必须与淋病鉴别。临床上除潜伏期比淋病长外，在临床经验上，病程较长，未经治疗时症状自然消退比淋病慢，NGU必须与淋病鉴别，临床上除此之外潜伏期长外，在临床经验上，NGU病程较长，未经治疗时症状自然消阻塞比淋病菌慢，可在一个长时期内保持一个低程度的尿道炎症状，忆观察到一例NGU患者其症状持续了望年2年。在临床表现上，NGU与淋病菌的区别在于尿道分泌物较少，常呈水样透明，排尿困难也没有淋病严重。妇性NGU症状轻，临床上很难与淋病区别，但实验室检查很容易鉴别，淋病患者培养可发现淋病双球菌，分泌物涂片可查见多形核白细胞（PMN）内有革兰氏阴性双球菌。
　　NGU的诊断有以下几个方面：
　　1，尿道分泌物和尿液的检查
　　对男性常用排除淋病后的尿道分泌物涂片中PMN计数法，高倍（400倍）每视野PMN10个以上，或油镜（1000倍）每视野PMN4个以上可作诊断。PMN不是在全部涂片中，而有集中性这些PMN可见于是60-90%的有症状患者，但也会有15-50%查不到PMN，所以这一诊断方法仍不完全可靠，刚排过尿也可减少涂片中PMN的数目，但对那些有不洁性交史和有尿道貌岸然分泌物者，少数PMN也要考虑诊断。
　　另一个方法是分段尿涂片法：前功尽弃5毫升尿轩于一个容器，以后的尿轩于另一个容器。粘液索存在于第一部分而不存在于第二部分提示尿道炎。这两部分分别离心沉淀400倍镜检，第一部分尿视野中有10个以上PMN强烈支持尿道炎，特别是第一部分尿比第二部分尿中PMN多，但同等数量提示膀胱炎或肾盂炎。这一分段尿涂片方法比棉拭子插入尿道取分泌物涂片优越，很敏感，每当00倍视野中草药0个以上PMN见于80%的男性NGU患者。
　　从尿道分泌物或尿液涂片中诊断淋病并发NGU是不行的，因为淋菌性尿道炎也存在许多PMN。衣原体NGU与支原体NGU除分离出病原体外，涂片上也涌区别，有人指出沙眼衣原体所致的NGU在涂片镜下可见到滤光（相似于沙眼中的发现），但一般很难看到滤泡，以致未被公认。
　　Perea等和Veeravahu等提出用白细胞脂酶活性快速筛选NGU，因为白细胞脂酶为PMN所特有，其活性与PMN的数目有直接关系。具体方法是用一个含吲哚酚羧酸脂的滤纸条浸入尿中草药秒钟，根据反应的颜色判断结果（淡红至紫色），不同的颜色变化可以定量地反映出尿中PMN的数目，但无特异性，只能用于NGU的筛选，特别是无症状者。
　　2，直接涂片检查
　　即在感染细胞的涂片上染色，直接检查沙眼衣原体包涵体，染色方法有姬姆萨，碘和免疫荧光法。这一染色法公在重症沙眼和新生儿的沙眼衣原体D-K血清弄所致的结膜炎有应用价值，对生殖器衣原体感染不敏感，敏感性仅50%左右，因为生殖器感染能取得的上皮细胞少，包涵体更少。
　　目前在直接涂片检查方面有两种已经商品化的实验室检查方法，也是近几年来衣原体感染诊断方法的重大进展：①直接涂片的单克隆抗体荧光染色法（MicroTrak test），用荧光素标记的抗衣原体单克隆抗体来检查细胞涂片中的衣原体，检查原生小体主要外膜蛋白的抗原决定簇，在染红的上皮细胞中或细胞外有苹果绿色针尖大小的光点，可在92-95%沙眼衣原体培养阳性的男性病人中发现，但技术要求高。标本取法：男性2h以上不排尿，棉拭子插入尿道2-4cm，轻轻旋转5s，放置2-3s，然后取出培养。女性用窥阴器充分露暴宫颈，第一根拭子将宫颈表面分泌物擦掉，第二根拭子插入宫颈1-2cm，旋转10s，停2-3s，取出拭子，不要碰阴道壁。②衣原体酶染色法，直接从标本中查衣原体抗原，已经制成反应盒，敏感性67-97%，特异性92-98%。
　　此外，细胞学方面的新的抗原检测方法如免疫过滤染色，衣原体质粒和染色体DNA探针以及核酸杂交法诊断衣原体感染，目前都在进一步的研究中。
　　3，病原体培养：对沙眼衣原体的分离成功是最好的确诊方法。
　　细胞培养：常用的细胞为Mccoy细胞和Hela229细胞，这是检查衣原体感染最可靠的方法。
　　酶标抗体(ELISA)法。
　　在体外培养的方法有三种：鼠脑内、腹腔内和静脉内接种，鸡胚卵黄囊接种和细胞培养。
　　支原体也需要经过培养而鉴定。
　　4，血清学诊断：此法在临床应用上不够满意，特异性和敏感性不很高。衣原体血清学检查应以微量免疫荧光法为主。在明确诊断方面，血清学虽不能代替衣原体分离，但在感染流行中排除某些人群仍是经济有效的方法。
　　5，酶链聚合反应(PCR)。可对衣原体、支原体。原理上十分可靠，但由于对实验室条件要求很高，目前国内很多医院、诊所的条件不具备，反而是最不可靠的方法之一。卫生部明文规定不能以PCR结果确诊。
　　6，尿道分泌物革兰氏染色后镜检。
　　
　　在医院通常采用的检查方法是：
　　①细菌培养：细菌数大于20万，可查见衣原体（+）和支原体（+）。取早上首段尿沉渣镜检，在500倍显微镜视野下多形核白细胞15个以上者。
　　②分泌物涂片：可查见衣原体（+）和支原体（+）
　　
　　[诊断要点]
　　1．1—3周内有不洁性交史，或配偶有感染史。
　　2．尿道炎症状，这在男性较为突出，女性则为尿频，排尿困难，或有宫颈炎，外阴炎，白带多。
　　3．尿道分泌物涂片检查显微镜每高倍视野下多形核白细胞数＞15个，革兰染色镜检末见阴性双球菌，培养淋球菌阴性。
　　4．培养或其他方法证实有衣原体或支原体。
　　中国卫生部防疫司制订四条诊断标准如下：
　　一、除外淋菌尿道炎，尿道分泌物涂片GRAN染色未见白细胞内外GRAN阳性，双球菌培养无淋菌生长。
　　二、病史，有尿道分泌物及排尿困难史。
　　三、体格检查，有脓性，粘液脓性或白色尿道分泌物。
　　四、实验室检查：尿道分泌物GRAM染色，在1000倍显微镜视野下多形核白细胞数大于五个。
　　至少符合上面三项标准中的二条。
　　 项目 非淋 淋病
潜伏期 长，一般1-3周 短，一般2-3天
全身症状 没有或轻微 急性期常有轻重症状
局部 轻，尿道刺痒 明显刺痒刺痛
尿道分泌物 粘液性，稀薄，量少 脓性，粘稠，量多
分泌物培养 衣原体支原体 淋球菌